Що таке ПЛР? Хибнопозитивний результат ПЛР

Що таке ПЛР? Хибнопозитивний результат ПЛР
Діагностика на основі полімеразної ланцюгової реакції, з'явилася 30 років тому завдяки дослідженням американського вченого Керрі Мюллеса. Метод отримав широке поширення і став проривом в мікробіологічних дослідженнях.

В цілому, методика, запропонована Мюллесом, дозволяє клонувати гени. Суть виявленого в результаті досліджень інструменту мікробіологічної діагностики полягає в наступному. Серед величезної кількості генної інформації стало можливим знайти певний мікроділянка з потрібним ДНК-кодом. Цей фрагмент, використовуючи природну здатність ДНК до реплікації (розмноження), потім багаторазово клонують.

Весь процес відбувається в пробірці. Розмноження зразка здійснюють за допомогою ферменту полімерази. Дві проби, взяті для певної ділянки ДНК, прочісують розчин у пошуках комплементарних ділянок і приєднуються до них. Утворюється стартовий ділянку, який надалі копіюється. Ось що таке ПЛР.

Природне розмноження ДНК відбувається постійно в будь-якому живому організмі. Порівняно молодий метод діагностики, описаний вище, дозволяє керувати цим процесом. Причому дія виявляється не на всю молекулу цілком, а тільки певну частину нуклеїнової кислоти (ДНК). Реакція повторюється, збільшуючи фрагментарні ділянки ДНК в геометричній прогресії, тому реакція названа ланцюгової.

Для того, щоб процес ланцюгової реакції був запущений, зібраної для аналізу биосреде повинен бути присутнім чужорідний елемент, інакше реакції не буде.




Сфери застосування



Діагностичні дослідження на основі ПРЦ успішно застосовуються, передусім, у медицині. Цей метод дозволяє виявляти інфіковані вірусами клітини і генетичні хвороби. Пульмонологи мають можливість виявляти вірусні види пневмонії та туберкульозу. У практиці гінекології і урології є можливість проводити дослідження для визначення захворювань, які раніше могли залишатися непоміченими у пацієнтів багато років, наприклад, уреаплазмоз і хламідіоз. В даний час метод полімеразної ланцюгової реакції використовують для діагностики інфекційних захворювань практично у всіх областях медицини.

Незамінні такі дослідження й у криміналістів. З аналізу ДНК, взятої з біологічного матеріалу, який залишається на місці злочину, фахівці можуть визначати причетність тих чи інших осіб. Випадки коли злочинець не залишає ніяких слідів, стерши відбитки пальців, давно стали історією.

Навіть не стикаючись з поняттям ПЛР, що це таке не знаючи, багато змогли на собі відчути переваги цього методу діагностики. Такі дослідження здатні виявляти поодинокі клітини збудники, що не під силу іншим імунологічним і бактеріальним способів діагностики. Реакція триває всього кілька годин, це дозволяє видати результат протягом робочого дня.



Помилки в результатах досліджень



Під час щоденної роботи лабораторії в пробірках отримують велику кількість ДНК-матеріалів. Порушення процесу досліджень біоматеріалів можуть призвести до ложноположительному або ложноотрицательному результату діагностики. Порушення правил хоча б в одному з етапів ланцюгової реакції може привести до помилкового результату.

Лікар, роблячи огорожу біоматеріалів, повинен уважно ставитися до своїх обов'язків. В мазках або подряпин не повинно бути сторонніх елементів, наприклад, клітин крові. У теж час для повноцінного дослідження необхідно присутність в матеріалі достатньої кількості епітеліальних клітин, а недобросовісно зібраний матеріал буде утримувати великий відсоток неінформативні слизу.

У великій мірі впливає на хибнопозитивний результат ПЦЗ спосіб транспортування і зберігання інфікованих ДНК-клітин. Через порушення технологічних вимог до процесу проведення всіх етапів дослідження, інфікований матеріал може зазнати руйнування або зміни своєї структури, що призведе до неможливості проведення реакції.

Як і всі інші лабораторні дослідження, полімеразна ланцюгова реакція вимагає належної обробки всіх використовуваних інструментів. Лабораторія та персонал повинні дотримуватися стерильність на всіх етапах проведення діагностичних досліджень. Недотримання санітарних норм можуть привести до виявлення сторонньої інфекції, відповідно, і до псевдопозитивного результату в оцінці обстеження.

Велике значення для якості проведеної роботи мають використані реагенти. Для діагностики за допомогою полімеразної ланцюгової реакції ДНК поміщають в розчин нуклеотидів. Всі речовини повинні бути придатними до використання. Здешевлення процесу призводить до зниження рівня його ефективності.

Метод діагностики на основі ПЛР дає 100% результат. Але з-за того, що використовувані матеріали дуже чутливі до різного роду факторів, абсолютно вірний результат може дати тільки кваліфікована лабораторія.
Додати коментар